АлАт-2 (по Райтману-Френкелю)
Новинка
Дата выхода товара на
рынок:
В наличии
Сфера применения товара:
Лабораторные исследования
Поставщик:
| t°C хранения | 18-25 °С |
| Объем рабочего реагента или кол-во опр. | 400 опр. (кон. объем пробы 3,05 мл) |
| Кат.№ 001.001 , 001.002, 001.011 |
Набор реагентов для определения активности аланинаминотрансферазы унифицированным методом Райтмана-Френкеля
Принцип метода:
L-аланин + -кетоглутарат ¬¾АЛТ ¾® пируват + L-глутамат
Активность АЛТ пропорциональна количеству образовавшегося пирувата, которое определяется фотометрически по реакции с 2,4-динитрофенилгидразином.
Исследуемый материал:
Свежая сыворотка крови без следов гемолиза. Активность ферментов в сыворотке снижается после 3 дней хранения при 4°С - на 10%, при 20°С - на 17%.
Состав набора:
Реагент № 1. Буфер-субстратная смесь.
Реагент № 2. Раствор 2,4-ДНФГ.
Реагент № 3. Калибратор (раствор пирувата натрия ) -1,0 ммоль/л .
Реагент № 4. Натрий едкий (концентрат) .
Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность:
|
Флаконы №1, № 2 и №3 содержат готовые к использованию реагенты. Срок хранения –12 месяцев при 18-25 °С. Дата изготовления, серия и номер набора по каталогу указаны на упаковке. Необходимо тщательно закрывать флаконы непосредственно после каждого использования реагентов. Содержимое флакона № 4 (или аликвоту) следует развести бидистиллированной водой, свободной от карбонатов, в 10 раз; хранить в полиэтиленовой таре. |
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА:
|
Поместить в пробирки |
Опытная проба |
Контрольная проба |
|
Реагент № 1, мл
|
0,25 |
0,25 |
|
Сыворотка крови, мл |
0,05 |
¾ |
|
Инкубация при 37 °С в течение 30 мин |
||
|
Реагент №2, мл Сыворотка, мл |
0,25 ¾ |
0,25 0,05 |
Через 20 минут (18-25 °С) в пробирки внесите по 2,5 мл разведенного ( 0,4 моль/л ) раствора NaOH и через 5-10 минут фотометрируйте опытные и контрольные пробы против воды при длине волны 537 нм ( 500 -560 нм ).
ПОСТРОЕНИЕ КАЛИБРОВОЧНОГО ГРАФИКА:
|
№ |
Реагент № 3 |
Вода дистиллиров. |
Реагент № 2
|
Ферментативная активность |
|
|
|
мл |
мл |
мл |
мкмоль/(с × л) |
ммоль/(ч × л) |
|
1 2 3 4 5 6 контроль |
0,050 0,100 0,150 0,200 0,250 0,300 - |
0,550 0,500 0,450 0,400 0,350 0,300 0,600 |
0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 |
0,278 0,556 0,834 1,112 1,390 1,668 - |
1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 - |
Через 20 минут (18-25 °С) в пробирки внесите по 5,0 мл 0,4 моль/л раствора NaOH и через 5-10 минут фотометрируйте против контрольной пробы при длине волны 537 нм
( 500-560 нм ).
(lоpt = 537 нм) в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см.
По калибровочному графику рассчитайте коэффициент К = А / Е,
где А – активность фермента, взятая из таблицы, Е – экстинкция соответствующей калибровочной пробы.
Активность фермента в исследуемой пробе ( Апр ) рассчитайте по формуле
Апр = К × ( Еоп – Еконтр ),
где К - коэффициент, рассчитанный по калибровочному графику, Еоп - экстинкция опытной пробы, Еконтр - экстинкция соответствующей контрольной пробы.
При активности фермента, превышающий 3 ммоль/(ч × л) или 0,834 мкмоль/(с × л) сыворотку крови рекомендуется развести и учесть степень разведения при расчете.
Обратите внимание: в ряде случаев может отсутствовать пропорциональность между степенью разведения и активностью фермента в разведенной сыворотке.
Нормальные величины АЛТ - до 0.19 мкмоль/(с×л) или
до 0,68 ммоль/ (час × л )
Аналитические характеристики набора:
Линейность - до 250 нмоль/л пирувата
Воспроизводимость - коэффициент вариации не более 10%
Литература:
Reitman S., Frankel S. Amer.J.Clin.Pathol.,1957, vol.28, p. 56; Лабораторные методы исследования в клинике. Под ред. В.В. Меньшикова. М., «Медицина», 1987.